酶指的也就是一種生物催化劑,絕大多數(shù)的女性對(duì)于酶應(yīng)該都是不會(huì)感到陌生的,因?yàn)楝F(xiàn)在就有很多的女性通過酶來減肥,說到酶人們可能還會(huì)覺得有些困惑,它怎么還能夠用來減肥呢?但提到酵素人們應(yīng)該就完全明白,酶其實(shí)也就是酵素。酶的活性強(qiáng),才能夠發(fā)揮一定的作用。但是酶活性受到很多因素的影響,影響酶活性的因素有哪些呢?
1.底物濃度
除選擇適合的底物外,在實(shí)際應(yīng)用中更多考慮的是底物濃度。由于[S]與反應(yīng)速度V成雙曲線關(guān)系,在酶活性測(cè)定時(shí),要求[S]達(dá)到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[S]范圍一般選擇在10~20Km為宜,此時(shí)反應(yīng)速度基本達(dá)到最大反應(yīng)速度,測(cè)定的誤差在可接受范圍。
2.酶濃度
在反應(yīng)條件一定時(shí),酶濃度與反應(yīng)速度成正比。按照中間產(chǎn)物學(xué)說,只有[S]>>[E]時(shí),酶才能被底物分子飽和,反應(yīng)速度才能達(dá)到最大值。因此當(dāng)標(biāo)本酶活力過高時(shí),應(yīng)將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后再加以測(cè)定。
3.溫度
不同的酶最適溫度可以不同,多數(shù)酶的最適溫度在37~40℃,高于或低于最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測(cè)定溫度尚未統(tǒng)一,但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室多使用37℃。溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響程度通常用溫度系數(shù)(Q10)表示。溫度系數(shù)指溫度每升高10℃,化學(xué)反應(yīng)速度增加的倍數(shù)。Q10通常為l~2。由溫度系數(shù)得知,溫度的變化對(duì)酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測(cè)定要在恒溫條件下進(jìn)行,溫度波動(dòng)要控制在±1℃。
4.離子強(qiáng)度和pH值
在最適pH時(shí),酶的活性最強(qiáng),高于或低于最適pH,酶的活性都降低,多數(shù)酶的最適pH在5~8之間。在測(cè)定酶活性時(shí),要求緩沖液具有足夠的緩沖容量,以便使pH值保持穩(wěn)定。血漿或血清標(biāo)本含有多種緩沖溶質(zhì),具有較強(qiáng)的緩沖能力。為了防止血漿或血清標(biāo)本緩沖溶質(zhì)對(duì)反應(yīng)液酸堿度的影響,使pH不致偏離設(shè)定值,標(biāo)本用量不宜過大,血漿或血清標(biāo)本體積/反應(yīng)液體積≤1/10為宜。
5 輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結(jié)合酶的輔助因子,例如Zn2+是羧基肽酶的輔基,Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,NADH是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現(xiàn)活性,因此在酶活性測(cè)定時(shí),就要保證輔基或輔酶的供給。
5.激活劑
6.有些酶在有激活劑存在時(shí)才有活性或活性較高,例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑,Cl-是淀粉酶的激活劑。因此在酶活性測(cè)定時(shí),也要滿足酶對(duì)激活劑的需要。
7.抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,后者又可分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。重金屬離子和砷化物對(duì)巰基酶的抑制、有機(jī)磷對(duì)羥基酶的抑制屬于不可逆抑制;丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對(duì)二氫葉酸合成酶的抑制屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制;哇巴因?qū)a+,K+-ATP酶的抑制屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測(cè)定酶活性時(shí),應(yīng)避免抑制劑的影響。